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无需跑胶,无需转膜!比Western Blot更便捷、准确的Simple Western来啦!

2023-04-23 文章来源: 浏览量: 分享到:

Q

图片



什么是Simple Western?

它的工作原理是什么?

A

采用微量样品管,以一根毛细管作为载体,结合专利的内涂层技术,可以实现在同一样品管中完成样品的上样、分离、固定、免疫放大和化学检测,并自动进行数据分析,整个过程无需人工干预, 可有效提高检测结果的准确性和可重复性。



Q

Simple Western的作用是什么?

A

与传统western blot 一致,都能够检测蛋白表达量。

Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子体育学、体育化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或体育组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。



Q

与传统western blot相比,

Simple Western有哪些优点?

1

实验流程标准化、自动化


Simple Western 技术可实现所有检测步骤的自动化,包括蛋白分离、固定、免疫印迹、洗涤、检测及数据分析等。可避免传统方法因实验步骤繁多、检测流程较长而最常导致的结果重复性差问题。



2

上样量小于传统western blot,节约珍贵样品



由于采用了毛细管电泳微缩技术,单个样品上样体积只需 3~5 μL浓度 0.1~4 μg/μL,因此可尝试数目有限的流式分选细胞、干细胞、珍稀的临床组织等等,而传统 WB 往往需要 20~100 μg 总蛋白。因此,上述珍稀样品往往不足以进行蛋白水平的实验,导致中心法则证据不完整。


3

蛋白分子量检测范围宽


2~440 kDa;由于蛋白固定机理与传统 WB 不同,因此 Simple Western 可检测高达几百 KDa 的大分子量蛋白,不需再摸索任何转膜条件;而在传统 WB 操作中,大分子量蛋白转膜效率极其低下,甚至完全无法转印。



4

数据分析标准化、自动化


软件将自动给出蛋白的表达丰度等数字信息,不需进行人工灰度分析, 数据分析不受传统 WB 条带形状、背景信号等干扰,避免主观倾向,更易被杂志认可;数字化定量数据亦可直接方便进行条形图绘制、T 检验、方差分析等统计实现。


5

条带图片漂亮规则,更易发表


Simple Western 技术将底层物理发光信号光斑转换成正态分布峰图,进而根据峰图输出规则美观的条带。传统 WB 中经常出现的哑铃条带、微笑条带、过曝空斑、背景噪点等问题,这不仅影响条带美观度,在条带圈选定量、背景扣除时也将引入很大的偏差,为了得到一张可发表的实验图片, 往往需要进行 n 多次重复实验。Simple Western 技术不仅保留了体育学意义上的表达关系,条带呈现形式也更加赏心悦目,结果更易被杂志接收。



6

样本通道完全独立,样本通道可自由组合、自由排列


各样本通道完全独立,在同一轮检测实验中,每个样本通道中可以各自检测不同种类的蛋白质,即每个样本通道中均可以各自使用不同抗体孵育,各样本通道间互不干扰;每根毛细管对应一个泳道,由于毛细管彼此独立,因此获得原始实验数据之后,可进一步将不同泳道进行排列组合,从不同角度阐释实验数据,一次实验可获得多张实验图片,从而避免了重复实验。

利用该仪器获得的数据已经在多个期刊发表 (Boyer et al. 2018; Xu et al. 2022)。 




Q

做Simple Western 送样有哪些要求吗?

A

组织 (>100 mg):取样后样品立即在液氮中速冻5min,放置在-80℃保存,送样时请在干冰中运输,如果市内可以使用冰袋运输;

蛋白质溶液: 请在干冰中运输;

细胞 (>106): 请用冰袋维持在4℃运输。